之前跟大家分享过一些色谱柱使用过程中的相关问题解答，包括“峰拖尾的解决思路”、“柱压升高过快的解决思路”、“色谱柱寿命不理想的解决思路”等等（点击蓝字回看往期内容），受到了大家的热烈欢迎，大家对这些内容的关注度以非常的高。

我们今天再带来一个热点问题的解决思路——“批次性之间重现性不好的解决问题”！

如果预期一个方法会被用到很多年，重现性将是色谱柱选择过程中的一个重要问题，需要确认方法在使用期间，色谱柱一直都在供应，意味着选择一家大型的愿意长期合作的厂商，选择一种常见的键合相，尽量少选择特殊或者较少使用的固定相。可以先选择一直合作的品牌开始，还应该从厂商出获得更多的色谱柱规格和批次重现性调查信息，综合评判。

以反相填料为例：同一批次的填料生产出不同的色谱柱，保留时间，塔板数，柱压，都会有点差异。

保留时间的改变与填料密度和色谱柱的体积成正比，色谱柱体积重现性取决于柱内径，柱内径改变后，保留时间会相应改变，但分离度保持不变，那说明你的方法重现性还是比较好的，在我们制定方法的时候，要正确的规定方法的洗脱时间表。生产厂家对柱体积改变效应造成的保留时间的改变RSD在3%左右，月旭从硬件上进行控制，将该数值控制在1%左右。

色谱柱塔板数的变化也会影响方法，特别是涉及到刚好能基线分离的一对色谱峰时，一般情况下塔板数的重现性在±10%左右，标准偏差减少至2-3%，但塔板数是一个平方数，分离度取决于塔板数的2次方根，因此塔板数改变2%意味着峰宽变化只有1%，可以核查一下色谱柱制造商的塔板数出厂控制数据。

任何填料在生产的过程中，柱压的重现性都比较好。

不同批次之间的色谱参数的重现性问题，那么上面提到的参数会有所改变，更重要的是不同批次的填料有可能引起分离选择性的变化，一位置相对保留时间会变化，表现在色谱图上的相对位置改变，不利于方法的确定。这个问题要避免的，可以从生产商那里收集批次重现性是否稳定的信息，一般是检测填料色谱性能的理化参数。

在理化参数中，更重要的是填料的比表面积，因为他的改变直接导致保留时间的改变，比表面积的变化范围在±10%，月旭控制在±5%。

在化学参数中，键合相的便面覆盖率的改变对保留时间的影响比较大，通常制造商会给出载碳量这个数值，会有一个详细的数值，通常范围是±10%，月旭控制在±4%以下。

制造商会有一个测试色谱重现性的试剂，采用尿嘧啶、苯酚、4-氯硝基苯、甲苯的混合溶液流动相是75%的有机溶剂水的中性条件，对疏水化合物之间的相对保留时间重现性一般比较好，而对于载碳量的改变不太敏感，较好的批次重现性测试是在测试混合物中加入碱性化合物，经过优选的碱性化合物（通常选用阿米替林）在优化过的条件下，主要和填料上游离硅醇基相互作用，而中性化合物主要和键合相相互作用，这样，碱性和中性化合物之间的相对保留时间是对反相填料批次重现性的严格测试。月旭积累了这一类批次重现性的测试数据，并控制在一个较小的范围内。

上面说到的厂家对重现行的控制和要求，是用于选择色谱柱的起点，更终测试是对项目本身的重现性测试，一些生产商会有不同批次的填料色谱柱包来用于具体项目测试，而另外一些生产商会根据客户的需求提供类似的不同批次的色谱柱，我们需要的是不同时间键合相的相同填料装填的色谱柱，而不是同一批次填料不同时间装填的色谱柱，建议使用三个不同批次键合的填料装填的色谱柱来测试方法的重现性，如果测试不受填料变化的影响，那可以相信该方法在几年内都是重现的。

看完这一期的“解决思路”感觉对您有所帮助吗？如果能够帮到您那就是我们更开心的了，针对色谱柱的使用维护您还有什么问题想要寻求帮助与解答吗？可以在文末留言，我们会选择提问频率较高的问题来为大家解答！